Настройка фазового и поляризационного контраста на Olympus BX43

Современный исследовательский микроскоп Olympus BX43 — это универсальная платформа, поддерживающая широкий спектр методов контрастирования, включая фазовый контраст и поляризационную микроскопию. Эти методы позволяют визуализировать прозрачные или слабо окрашенные объекты, невидимые в обычном светлом поле. Особенно актуальны они при изучении живых клеток, волокон, коллагена, кристаллических и анизотропных структур.

Фазовый контраст позволяет наблюдать внутреннюю морфологию прозрачных объектов без окрашивания, а поляризация — выделять материалы с двойным лучепреломлением. Olympus BX43 идеально подходит для использования этих методов благодаря модульной архитектуре, высококачественной оптике UIS2 и совместимости с разнообразными аксессуарами. Ниже представлен подробный алгоритм настройки и переключения между этими режимами контрастирования.

Подбор и установка соответствующих насадок и фильтров

Чтобы корректно настроить микроскоп Olympus BX43 для работы в фазовом и поляризационном контрасте, необходимо оснастить его соответствующими компонентами.

Для фазового контраста требуются:

• Фазовые объективы (с маркировкой Ph): например, UPlanFLN 10x Ph1, 20x Ph1, 40x Ph2, 100x Ph3
• Кольцевые фазовые диафрагмы (устанавливаются в револьвер или слайдер конденсора)
• Телескопический окуляр или Bertrand-линза для центровки фазовых элементов

Для поляризации необходимы:

• Поляризатор, устанавливаемый в осветитель (под конденсором)
• Анализатор, который монтируется в специальный слот тубуса или промежуточной насадки
• Ротационная предметная платформа (рекомендуется для тонких срезов и биокристаллических образцов)
• При необходимости — компенсаторы (λ, λ/4, кварцевый клин) для оценки степени анизотропии

Все вышеуказанные компоненты, включая оригинальные фазовые объективы и поляризационные насадки, можно приобрести в компании Микроптика, которая также предоставляет услуги по профессиональной настройке системы и обучению персонала.

Регулировка освещения и калибровка оптического тракта

Настройка фазового контраста

1. Установите нужный фазовый объектив и соответствующую диафрагму в конденсоре (например, Ph1 к 10x).
2. Включите освещение и выполните настройку по Кёлеру:
   • Отрегулируйте поле и апертурную диафрагмы
   • Центрируйте световое пятно
3. Используйте телескопический окуляр или Bertrand-линзу, чтобы совместить световое кольцо диафрагмы с фазовой пластиной объектива:
   • При несовпадении возможны ореолы, искажения и низкий контраст
4. Закройте телескоп и наблюдайте образец при корректном контрасте

Настройка поляризационного контраста

1. Установите поляризатор под конденсором, выровняв его по центральной оси
2. Введите анализатор в тубус, повернув его на 90° относительно поляризатора (крестовое положение)
3. Настройте Кёлеровское освещение
4. Вращайте предметный стол или анализатор для получения максимального интерференционного эффекта
5. Введите компенсатор, если необходимо оценить степень birefringence

Особенности наблюдения различных образцов и минимизация артефактов

В фазовом контрасте:

Подходящие образцы:

• Нежные клетки (гемоциты, эпителиальные клетки, сперматозоиды)
• Неокрашенные срезы тканей
• Живые культуры

Возможные артефакты:

• Гало-эффект — светящиеся ореолы вокруг объектов (особенно у границ)
• Падение резкости — при несоосности диафрагмы и фазовой пластины

Как минимизировать:

• Точно центрируйте фазовую диафрагму
• Используйте только объективы, откалиброванные под соответствующую фазу (Ph1, Ph2, Ph3)
• Контролируйте апертуру и яркость света

В поляризационном контрасте:

Подходящие объекты:

• Кристаллические структуры (соли, минералы)
• Волокнистые ткани (мышцы, соединительная ткань)
• Полимеры, пластики, синтетические пленки

Артефакты и как их избегать:

• Цветовые искажения — компенсируются правильным положением анализатора
• Фоновое свечение — устраните отражения, используйте черную маску в световом конусе
• Оптическое двоение — иногда полезно, но требует контроля при точных измерениях

Практические приемы быстрого переключения между методами контрастирования

Современная конструкция Olympus BX43 позволяет организовать эффективную систему переключения между фазовым и поляризационным режимами без разборки микроскопа:

• Используйте револьверные слайдеры в конденсоре с предустановленными фазовыми кольцами и свободной ячейкой для работы в поляризации
• Установите анализатор в выдвижной слот, чтобы быстро вводить и выводить его из оптического пути
• Применяйте быстросъёмные поляризаторы, которые фиксируются на защёлках под конденсором
• Если используется цифровая камера и ПО (например, Olympus cellSens), создайте пользовательские профили с параметрами для каждого режима: баланс белого, экспозиция, гамма и т.д.
• Настройте световую память, если микроскоп оснащён регулируемым LED-осветителем, чтобы быстро возвращаться к заданной яркости и температуре